Перейти к содержимому


Фотография

  • Закрытая тема Тема закрыта
В этой теме нет ответов

#1 admin

admin

    Администратор

  • Администраторы
  • 2 728 сообщений
  • ГородМосква

Отправлено 06 октября 2016 - 06:55

Лейман Т.С.

 

АНАЛИЗ ПОЛИМОРФИЗМА МИНИМАЛЬНОГО ГАПЛОТИПА Y-ХРОМОСОМНОЙ ДНК В КАЗАХСКОЙ ПОПУЛЯЦИИ

РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН

 

Молекулярно-генетические лаборатории Центра судебной экспертизы МЮ РК в своей работе для проведения экспертиз, связанных с идентификацией личности и установлением родства используют анализ гипервариабельных STR-локусов аутосомной и Y-хромосомной ДНК. Чаще всего используется анализ аутосомной ДНК, но в некоторых случаях необходимо исследование мужской Y-хромосомной ДНК, например, при проведении экспертизы с целью идентификации личности по делам, связанным с половыми преступлениями, либо в сложных случаях установления родства по мужской линии.

Очень часто именно в экспертизах, связанных с половыми преступлениями, встречаются смешанные следы. Как правило, это смесь женской и мужской ДНК на тампонах с содержимым влагалища, заднего прохода, ротовой полости, предметах одежды, изымаемых у потерпевшей. Методом дифференциального лизиса на стадии выделения ДНК не всегда удается полностью разделить женскую и мужскую ДНК. Поэтому для анализа таких образцов, в которых заведомо содержится смесь ДНК, рекомендуется использовать наборы реактивов для амплификации, специфичные только для Y-хромосомной (мужской) ДНК, такие как «AmpFlSTR Yfiler PCR Amplification Kit» (Applied Byosistems, США) или «PowerPlex®Y System» (Promega Corporation, США).

Ha Y-хромосоме, так же как и на всех аутосомах, существуют полиморфные тандемные повторы - STR-локусы, которые проявляют этно-расовую специфичность, что требует знания частот встречаемости каждого этноса для получения достоверно значимых результатов.

В результате исследования выявляется гаплотип мужской ДНК, присутствующей в образце. Гаплотип Y-хромосомной ДНК, в отличие от генетического профиля аутосомной ДНК, не является уникальным для каждого человека. Определение гаплотипа Y-хромосомной ДНК относится к установлению групповых либо узкогрупповых признаков, которые присущи определенной группе лиц: 1) имеющим общую этническую группу (групповые признаки), 2) кровным родственникам по мужской линии - (узкогрупповые признаки). Так как Y-хромосома наследуется только по мужской линии, то у лиц, состоящих в кровном родстве, гаплотип совпадает: 1) по вертикали (дед-отец-сын); 2) по горизонтали (дядя-отец-сын-брат).

По гаплотипу также возможно отличить друг от друга представителей различных популяций.

При вероятностно-статистических расчетах гаплотип Y-хромосомной ДНК оценивается как один STR-локус.

В экспертной практике среди лиц, в отношении которых проводятся молекулярно-генетические исследования, наиболее часто встречаются представители казахской этнической принадлежности.

Ранее нами уже была проведена работа по анализу частот встречаемости аллелей 15-полиморфных аутосомных STR-локусов ДНК в казахской и русской популяциях Казахстана1.

В данной работе нами предпринята попытка анализа полиморфизма минимального гаплотипа в казахской популяции Казахстана.

Целью исследования было изучение полиморфизма и определение частот встречаемости минимального гаплотипа STR-локусов Y-хромосомной ДНК лиц казахской национальности, проживающих на территории Казахстана.

В основу исследования положены результаты экспертной практики лаборатории молекулярно-генетической экспертизы Института судебной экспертизы по г. Алматы Центра судебной экспертизы Министерства юстиции Республики Казахстан.

Нами были обобщены и изучены результаты молекулярно-генетических исследований за период с 2009 по 2013 гг. по идентификации личности. Выборка представлена образцами лиц, проходивших в качестве потерпевших и подозреваемых при производстве молекулярно-генетических экспертиз по различным категориям уголовных дел. Общее количество проанализированных по Y-хромосоме образцов составило 330. Для анализа были взяты гаплотипы лиц только казахской национальности (n = 276). Гаплотипы лиц, имеющих другую национальность или смешанное происхождение, не учитывались.

___________________

1 Ветринская А.А., Кузовлева Е.Б., Красоткин Е.В. Анализ частот встречаемости аллелей 15 полиморфных STR-локусов ДНК в казахской и русской популяциях Казахстана. /В сб. Доклады и сообщения международной научно-практической конференции «Восток-Запад: партнерство в судебной экспертизе». Алматы, 18-19 сентября, 2007 г. С.102-105.

 

Выделение ДНК из образцов крови и буккального эпителия проводили с использованием следующих наборов реактивов (по выбору эксперта): «ДНК-сорб-В» (АмплиСенс, Россия), «DNA IQ TM» (Promega,США), «ReadyAmpTM» (Promega, USA), согласно методике1.

Типирование полиморфных STR-локусов Y-хромосомы в полученных препаратах ДНК проводили в мультилокусном формате с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием систем энзиматической амплификации «AmpFlSTR Yfiler PCR Amplification Kit» (Applied Byosistems, США) по 17 локусам (DYS456, DYS389-I, DYS390, DYS389-II, DYS458, DYS19, DYS385 a/b, DYS393, DYS391, DYS439, DYS635, DYS392, YGATAH4, DYS437, DYS438, DYS448) согласно методике2.

Полимеразную цепную реакцию проводили с использованием ДНК-амплификатора «GeneAmp PCR System 2720» («Applied Biosystems», США), внося в реакционную смесь (общий объем 25 мкл) по 10 мкл полученных препаратов геномной ДНК. Для оценки специфичности реакции амплификации использовали положительный (контрольная ДНК 9947А с известными генетическими признаками из набора реагентов) и отрицательный (проба без ДНК) контроли.

Разделение и детекцию флуоресцентно меченых амплифицированных фрагментов проводили с использованием генетического анализатора «ABI Prism 3130» («Applied Biosystems», США). Идентификацию аллелей проводили с помощью программного комплекса «GeneMapperlD» v.3.2 на основе входящего в состав набора аллельного лэддера.

Далее для целей настоящей работы был проведен статистический анализ исследуемой выборки по 7 локусам (DYS389-I, DYS390, DYS389-II, DYS19, DYS385 a/b, DYS393, DYS391, DYS392), так называемому минимальному гаплотипу. Анализ проводили с использованием программного обеспечения Microsoft Excel®.

В результате проведенных исследований для каждого образца ДНК из выборки получен минимальный гаплотип по 7 локусам Y-хромосомной ДНК. Результаты исследования представлены в таблице 1.

 

Таблица 1 - Анализ полиморфизма минимального гаплотипаУ-хромосомы в казахской популяции

 

№ п/п

Кол-во выявленных гаплотипов

DYS19

DYS389-1

DYS389-II

DYS390

DYS391

DYS392

DYS393

DYS385 а, b

1

26

16

13

29

25

10

11

13

12,13

2

21

16

13

30

25

10

11

13

12,13

3

18

13

14

29

23

10

12

13

13,17

4

10

16

14

31

25

10

11

13

12

5

9

15

12

29

23

10

13

12

13,18

6

6

13

14

31

24

9

11

14

16

7

5

16

13

31

25

10

11

13

12,13

8

4

14

14

30

19

11

13

13

13

9

4

15

12

28

23

10

13

12

13,18

10

4

15

13

29

24

10

11

14

12,14

11

3

13

13

30

23

10

14

14

15,17

12

3

13

14

30

23

10

11

12

15,16

13

3

14

13

28

23

10

12

12

12,19

14

3

15

14

31

25

10

11

13

12,16

15

3

16

13

29

25

10

11

13

11,12

16

3

16

14

31

24

9

11

13

12,17

17

3

16

13

30

25

11

11

14

11,14

18

2

13

14

19

23

10

12

13

13,17

19

2

13

14

29

23

10

12

13

13,18

20

2

13

14

30

23

10

12

13

13,17

21

2

14

13

29

23

11

11

12

13,16

22

2

14

13

30

21

11

13

13

13,16

23

2

14

14

29

23

10

14

14

11,13

24

2

14

14

30

24

10

11

12

13,18

25

2

15

12

28

23

11

12

12

12,17

26

2

15

12

29

22

10

10

14

15,16

27

2

15

13

30

24

9

11

13

12,16

28

2

15

13

30

24

9

11

13

12,17

29

2

16

13

29

24

10

11

13

12,13

30

2

16

13

29

25

10

10

13

12,13

31

2

16

13

30

25

10

10

13

10,14

32

2

16

13

33

24

11

11

13

14,15

33

2

16

14

30

25

10

11

13

12

34

2

16

14

31

23

10

11

13

11,14

35

2

16

14

33

25

10

12

13

11,14

36

2

16

15

32

25

10

11

13

12

37

2

16

13

29

25

10

10

13

12

38

2

16

13

30

25

11

11

13

11,15

_________________

1 Методика выделения ДНК из различных объектов биологического происхождения для молекулярно-генетического исследования. Астана, 2006. Государственный реестр судебно-экспертных методик судебно-экспертных исследований 17.1 (3).

2 Методика судебно-экспертного молекулярно-генетического исследования с целью установления кровного родства /Ветринская А.А, Кузовлева Е.Б. 2006. Государственный реестр судебно-экспертных методик судебно-экспертных исследований 17.1 (4); Методика судебно-экспертного молекулярно-генетического исследования с целью идентификации личности. Астана, 2006. Государственный реестр судебно-экспертных методик судебно-экспертных исследований 17.1 (4).

 

В общей сложности в исследуемой выборке (n = 276) выявлено 38 гаплотипов, которые встречаются более 1 раза - всего 170 образцов. В остальных образцах (n = 106) гаплотипы отличаются.

Наибольшим количеством совпадений характеризуются гаплотипы № 1 и № 2 (26 и 21 образец соответственно). Причем данные гаплотипы отличаются между собой на 1 аллель по локусу DYS389-II: в гаплотипе № 1 наблюдается аллель № 29, в гаплотипе № 2 - аллель № 30.

Гаплотип № 3 встречается 18 раз, № 4 -10 раз, № 5 - 9 раз, № 6 - 6 раз, № 7 - 5 раз. По 4 раза встречаются гаплотипы №№ 8-10, по 3 раза - гаплотипы №№ 11-17 и по 2 раза - гаплотипы №№ 18-38.

Таким образом, в результате проведенных исследований выявлен значительный генетический полиморфизм казахской популяции по минимальному гаплотипу Y-хромосомной ДНК, что свидетельствует о большой вариабельности генетических признаков.

Принимая во внимание, что в настоящее время имеют место значительные миграционные потоки внутри страны, а также тот факт, что в молекулярно-генетической лаборатории Института судебной экспертизы по г. Алматы проводятся экспертизы из всех регионов Казахстана, считаем, что полученные данные включают в себя информацию о гаплотипах лиц казахской национальности, проживающих в различных регионах и могут быть использованы применительно ко всему казахскому населению Казахстана. Однако, следует учитывать, что представители одной этнической группы (рода) традиционно проживают в определенной местности, поэтому распределение гаплотипов среди мужского населения в различных регионах может сильно отличаться. В связи с этим, считаем, что для получения полной картины распределения гаплотипов среди лиц казахской национальности необходимо увеличить размеры выборки и продолжить работу с привлечением данных, полученных в других лабораториях ЦСЭ МЮ РК.


 А д м и н и с т р а т о р

 e-mail: 111@fse.ms

 tel: 8(800)555-0-453 (Для регионов)

 tel: 8(495) 666-5-666 (Для Москвы и МО) 

 Wiber: +7(926)04080436 

 WhatsApp: +7(926)04080436

 

 Наш портал: http://sud-expertiza.ru

 Промо-сайт http://fse.ms

 

 




Темы с аналогичным тегами тест днк, анализ днк, экспертиза днк, экспертиза родства, установление родства, установление отцовства, лаборатория днк, тестирование днк, проведение экспертизы днк, как установить отцовство

Количество пользователей, читающих эту тему: 0

0 пользователей, 0 гостей, 0 анонимных

Бесплатные консультации судебных экспертов. Консультации экспертов и оценщиков круглосуточно. Мы работаем без праздников, выходных и без перерывов на обед. Работаем по субботам и по воскресеньям. Принимаем заявки на экспертные услуги в ночное время.